篩查是指在癌癥出現(xiàn)明顯癥狀前通過某些方法去發(fā)現(xiàn)它，通過篩查可以發(fā)現(xiàn)早期的癌癥、甚至癌前病變。宮頸癌的篩查包括宮頸細(xì)胞學(xué)檢測及人類乳頭狀瘤病毒(HPV)檢測。細(xì)胞學(xué)檢測包括巴氏涂片和TCT液基細(xì)胞壓片。TCT相較于巴氏涂片更易于發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞，敏感性較高，但價格相對較高。HPV DNA檢測相比細(xì)胞學(xué)檢測的靈敏度更高，而且能夠?qū)Ω呶Ｐ秃偷臀Ｐ瓦M(jìn)行分型和定量檢測，是目前宮頸癌早期診斷主要發(fā)展方向之一。一旦細(xì)胞學(xué)或者DNA病毒篩查發(fā)現(xiàn)異常，可進(jìn)一步實(shí)施陰道鏡和組織活檢，并開展進(jìn)一步治療。

HPV分子診斷技術(shù)詳解

1、qPCR

qPCR, (Real-time Quantitative PCR，即實(shí)時熒光定量PCR)，是PCR的第三代技術(shù)。該技術(shù)通過在擴(kuò)增時向擴(kuò)增產(chǎn)物做個熒光標(biāo)記，隨著產(chǎn)物的增加，熒光信號增強(qiáng)，通過實(shí)時檢測熒光信號就能得到擴(kuò)增的DNA數(shù)量。熒光定量檢測根據(jù)所使用的標(biāo)記物不同可分為熒光探針和熒光染料，主要有TaqMan探針（以美國ABI公司為代表）和FRET技術(shù)（以羅氏公司為代表）和SYBR Green I，EvaGreen、LC Green熒光染料等。我手上有一份TermoFisher出的實(shí)時熒光定量 PCR 手冊，可關(guān)注后回復(fù)“實(shí)時熒光定量 PCR 基礎(chǔ)知識”下載領(lǐng)取。

qPCR原理之一

2、PCR-反向點(diǎn)雜交

PCR-反向點(diǎn)雜交，也稱反向斑點(diǎn)雜交。PCR-反向點(diǎn)雜交即將生物素標(biāo)記的特異性PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與固定于膜上的探針雜交顯色，進(jìn)行基因分型、基因突變的檢測。這種方法最大的特點(diǎn)是結(jié)合PCR進(jìn)行核酸分子擴(kuò)增，通過在不同位置固定數(shù)十甚至數(shù)百種等位基因，只需要1次雜交，就可以實(shí)現(xiàn)多種等位基因的篩查。是DNA印跡技術(shù)的進(jìn)化版本。

3、基因芯片

基因芯片本質(zhì)上也是依靠DNA分子的雜交，其與反向斑點(diǎn)雜交有著異曲同工之處?；蛐酒诨椎倪x擇上更廣，固定探針數(shù)量也更多，其加工也更依賴于微加工技術(shù)，因此稱為基因芯片。個人認(rèn)為，基因芯片會是DNA印跡技術(shù)最主要發(fā)展方向。

基因芯片

4、流式熒光雜交法（fluorescence in situ hybridization,FISH）

該技術(shù)源于熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）。FISH是利用標(biāo)記的DNA探針，在細(xì)胞內(nèi)部與DNA進(jìn)行原位雜交，并用熒光的方式作為信號讀出。流式熒光雜交法是將熒光標(biāo)記的細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行快速的分析檢測。該方法最大的好處是編碼方便，可實(shí)現(xiàn)多種亞型DNA的檢測，自動化程度相對于膜條法更高。

FISH原理

5、恒溫?cái)U(kuò)增-熒光法

與PCR不同，恒溫?cái)U(kuò)增其反應(yīng)過程始終維持在恒定溫度下，通過添加不同活性的酶和各自特異性引物來達(dá)到快速核酸擴(kuò)增的目的。其中的技術(shù)原理很多，如LAMP、RPA和RCA等，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（loop-mediated isothermal amplification，LAMP）是應(yīng)用最多的技術(shù)。該技術(shù)反應(yīng)快，操作簡便，且具備肉眼讀出的特點(diǎn)，目前主要用于POCT等快檢領(lǐng)域。該方法還會持續(xù)在DNA的快速檢測等方面具有更廣闊的應(yīng)用。關(guān)于LAMP的詳細(xì)介紹，可關(guān)注后回復(fù)“LAMP技術(shù)”下載。

LAMP原理

6、HC2-HPV-DNA

HC2即二代雜交捕獲。相對于一代雜交，HC2和ELISA有異曲同工之處。首先把樣品中的細(xì)胞失活，釋放DNA分子。釋放的DNA與HPV 的RNA探針結(jié)合，并被單克隆抗體捕獲。加入偶聯(lián)了HRP的二抗，通過HRP催化的化學(xué)發(fā)光進(jìn)行最后的信號讀出。該技術(shù)由美國馬里蘭州的分子診斷公司Digene研發(fā)，由于不需要擴(kuò)增，取樣簡單，污染小，可一次性檢出13種高危HPV亞型，具有很高的應(yīng)用價值。關(guān)于該法的具體視頻介紹，可關(guān)注后回復(fù)“HC2-HPV-DNA視頻”下載。

HC2-HPV-DNA

7、PCR毛細(xì)管電泳法、雜交捕獲化學(xué)發(fā)光法和測序法

PCR毛細(xì)管電泳法就是利用毛細(xì)管電泳來對PCR的產(chǎn)物進(jìn)行分析。該方法最大的缺點(diǎn)是無法對DNA進(jìn)行分型檢測。雜交捕獲化學(xué)發(fā)光法相對于斑點(diǎn)雜交在于最后的信號讀出由熒光信號轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)發(fā)光。測序法是利用測序儀器對DNA進(jìn)行測序，目前國內(nèi)主要由華大基因主導(dǎo)。

國內(nèi)HPV檢測技術(shù)分類占比情況

數(shù)據(jù)來源：國家藥品監(jiān)督管理局。關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒，國產(chǎn)器械。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)包未包含2014年以前注冊。

國內(nèi)公司HPV試劑盒注冊匯總